Használati útmutató
DG -0130-C-Kit
1. Mérje össze a következő reakciót mintánként mindegyik Master Mix-szel:
-10μl Deltagene C-Kit Master Mix
-min. 20ng DNS
-MilliQ víz 15 μl-ig
2. Az alábbi programon végezze a PCR reakciót:
|
1.
|
95 ºC
|
3 min
|
|
2.
|
95 ºC
|
20 sec
|
|
3.
|
55ºC
|
20 sec
|
|
4.
|
72 ºC
|
30 sec
|
|
5.
|
GO TO STEP 2.
|
45x
|
|
6.
|
72 ºC
|
5 min
|
|
7.
|
4 ºC
|
HOLD
|
|
8.
|
END
|
|
A kapott PCR terméket futtassa meg 2%-os agaróz gélen DNS marker jelenlétében. A különböző exonok esetén a következő fragmentméreteket kapjuk:
Exon9-1: 229bp
Exon9-2: 259bp
Exon11: 274bp
Exon13: 214bp
Exon17-1: 315bp
Exon17-2: 252bp
A PCR fragmentek megszekvenálásával kimutatható a mutáns allél jelenléte. Mindegyik exonhoz a saját szekvenáló primer-jét használjuk, amelyek a kitben megtalálhatóak.



