Használati útmutató
DG-0129-PDGFRA
1. Mérje össze a következő reakciót mintánként mindegyik Master Mix-szel:
-10μl Deltagene EGFR Master Mix
-min. 20ng DNS
-MilliQ víz 15μl-ig
2. Az alábbi programokon végezze a PCR reakciót:
A 10. 14. 18. exonok esetén:
|
1.
|
95 ºC
|
3 min
|
|
2.
|
95 ºC
|
20 sec
|
|
3.
|
62ºC
|
20 sec
|
|
4.
|
72 ºC
|
30 sec
|
|
5.
|
GO TO STEP 2.
|
45x
|
|
6.
|
72 ºC
|
5 min
|
|
7.
|
4 ºC
|
HOLD
|
|
8.
|
END
|
|
A 12. exon esetén:
|
1.
|
95 ºC
|
3 min
|
|
2.
|
95 ºC
|
20 sec
|
|
3.
|
55ºC
|
20 sec
|
|
4.
|
72 ºC
|
30 sec
|
|
5.
|
GO TO STEP 2.
|
45x
|
|
6.
|
72 ºC
|
5 min
|
|
7.
|
4 ºC
|
HOLD
|
|
8.
|
END
|
|
A kapott PCR terméket futtassa meg 2%-os agaróz gélen DNS marker jelenlétében. A különböző exonok esetén az alábbi fragmentméreteket kapjuk:
Exon10: 361bp
Exon12: 302bp
Exon14: 264bp
Exon18: 262bp
A PCR fragmentek megszekvenálásával kimutatható a mutáns allél jelenléte. Mindegyik exonhoz a saját szekvenáló primer-jét használjuk, amelyek a kitben megtalálhatóak.



