Használati útmutató
DG -0128-BRCA2
1. Mérje össze a következő reakciót mintánként mindegyik Master Mix-szel:
-10μl Deltagene BRCA2 Master Mix
-min. 20ng DNS
-MilliQ víz 20 μl-ig
2. Az alábbi programon végezze a PCR reakciót:
|
1.
|
95 ºC
|
3 min
|
|
2.
|
95 ºC
|
30 sec
|
|
3.
|
64ºC
|
30 sec
|
|
4.
|
72 ºC
|
30 sec
|
|
5.
|
GO TO STEP 2.
|
39x
|
|
6.
|
72 ºC
|
5 min
|
|
7.
|
4 ºC
|
HOLD
|
|
8.
|
END
|
|
A kapott PCR terméket futtassa meg 1.5%-os agaróz gélen DNS marker jelenlétében. A különböző mutációk esetén az alábbi fragmentméreteket kapjuk:
|
Mutáció neve
|
Fragmentméret
|
Szekvenáló primer
|
|
6079delAGTT, 6174delT, 6274delT
|
526bp
|
forward
|
|
8034insAG
|
517bp
|
reverz
|
|
8138delCCTTT
|
518bp
|
8138 szek. primer
|
|
9326insA
|
472bp
|
forward
|
A PCR fragmentek megszekvenálásával kimutatható a mutáns allél jelenléte. A fenti táblázatban látható, hogy a különbőző mutációk esetén melyik szekvenáló primer használandó, melyek a kitben megtalálhatóak.



