Bejelentkezés





 

Használati útmutató
DG -0126-EGFR
 
 
1. Mérje össze a következő reakciót mintánként mindegyik Master Mix-szel:
 
-10μl Deltagene EGFR Master Mix
-min. 20ng DNS
-MilliQ víz 20 μl-ig
 
2. Az alábbi programon végezze a PCR reakciót:
 

1.
95 ºC
3 min
2.
95 ºC
30 sec
3.
55ºC
30 sec
4.
72 ºC
30 sec
5.
GO TO STEP 2.
45x
6.
72 ºC
5 min
7.
4 ºC
HOLD
8.
END
 

 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
A 19. exon esetében a fenti program kicsit módosítva használandó: emelje meg a ciklusszámot 50-re.
 

A kapott PCR terméket futtassa meg 1.5%-os agaróz gélen DNS marker jelenlétében. A különböző exonok esetén az alábbi fragmentméreteket kapjuk:

 
Exon18: 331bp
Exon19: 281bp
Exon20: 376bp
Exon21: 405bp
 
A PCR fragmentek megszekvenálásával kimutatható a mutáns allél jelenléte. A szekvenáló primert a kit tartalmazza, mely mind a 4 exon esetén használható.