Használati útmutató
DG -0126-EGFR
1. Mérje össze a következő reakciót mintánként mindegyik Master Mix-szel:
-10μl Deltagene EGFR Master Mix
-min. 20ng DNS
-MilliQ víz 20 μl-ig
2. Az alábbi programon végezze a PCR reakciót:
|
1.
|
95 ºC
|
3 min
|
|
2.
|
95 ºC
|
30 sec
|
|
3.
|
55ºC
|
30 sec
|
|
4.
|
72 ºC
|
30 sec
|
|
5.
|
GO TO STEP 2.
|
45x
|
|
6.
|
72 ºC
|
5 min
|
|
7.
|
4 ºC
|
HOLD
|
|
8.
|
END
|
|
A 19. exon esetében a fenti program kicsit módosítva használandó: emelje meg a ciklusszámot 50-re.
A kapott PCR terméket futtassa meg 1.5%-os agaróz gélen DNS marker jelenlétében. A különböző exonok esetén az alábbi fragmentméreteket kapjuk:
Exon18: 331bp
Exon19: 281bp
Exon20: 376bp
Exon21: 405bp
A PCR fragmentek megszekvenálásával kimutatható a mutáns allél jelenléte. A szekvenáló primert a kit tartalmazza, mely mind a 4 exon esetén használható.



